亚欧乱色视频网站大全,国产在线啪,不卡中文字幕在线观看,青青色在线视频,久久国产精品高清一区二区三区,国产a视频精品免费观看

食品伙伴網服務號
當前位置: 首頁 » 檢驗技術 » 培訓資料及講義 » 正文

雙向電泳樣品緩沖液選用的基本原則

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-06-19  來源:生物無憂
核心提示:1、蛋白質樣品的特征:復雜,含鹽或其他污染物易被蛋白酶降解動態范圍寬(X106)溶解性不均一(疏水性/親水性)分子量、等電點的范
 1、蛋白質樣品的特征:
復雜,含鹽或其他污染物
易被蛋白酶降解
動態范圍寬(>X106)
溶解性不均一(疏水性/親水性)
分子量、等電點的范圍寬(10-500KDa,pH2-14)
2、樣品分離的基本要求:
高靈敏度和分辨率
寬動態范圍
小樣品體積
高通量
合適的溫度和pH
避免蛋白酶降解
適合與高靈敏度的質譜聯用
盡量少的操作步驟減少污染和損失
3、樣品緩沖液的組成:
3.1 尿素:一種中性變性劑,破壞氨基酸殘基之間的非共價鍵和離子鍵而不影響等電聚焦,濃度范圍5-9.8mol/L,溶液不穩定,降解生成的氰酸根離子與蛋白質的氨基結合改變蛋白質的等電點.加精胺能降低影響.
3.2 硫尿:與尿素一起,能增加疏水膜蛋白的溶解性,缺點是在平衡液里與蛋白的半胱氨酸競爭結合碘代乙酰胺,會使蛋白的烷基化不完全,硫尿還有抑制SDS與蛋白質結合的作用,也可能增加脂類的溶解性,影響二向的效果.一般是2mol/L的硫尿與5-7mol/L尿素結合使用.
3.3 去污劑:蛋白質在去折疊后,會暴露出大量的疏水性殘基,去污劑用于破壞蛋白質分子間的疏水相互作用.陰離子去污劑SDS,不利于穩定等電聚焦中蛋白質的等電點,濃度不超過0.25%,
    NP-40:SDS>=8:1,常用的有非離子型去污劑Triton X-100和NP-40,兩性離子去污劑CHAPS,SB3-10等.非離子型去污劑和兩性離子去污劑能在不破壞蛋白質結構,保持生物活性的情況下改善蛋白質的溶解度,但是必須選擇合適的濃度,濃度太低不能改善蛋白質的溶解性,濃度太高會使蛋白帶變寬,影響分辨率和引起紋理現象.各種去污劑結合使用濃度范圍0.5-4%.
3.4 還原劑:還原劑能打開蛋白質的二硫鍵.一般使用β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)和二硫赤蘚糖醇(DTE),DTT和DTE本身帶有電荷,在等電聚焦時會遷移到pH范圍以外,從而使某些蛋白質的二硫鍵重新配對使溶解度降低而重新沉淀下來.一般的濃度范圍10-100mmol/L,非離子型還原劑如三丁基膦(TBP)2mmol/L能增加蛋白質的溶解性,并可幫助蛋白質從第一向轉移到第二向.不過TBP有劇毒,操作時應相當小心,并做好防護工作.
3.5 載體兩性電解質:它有兩個基本特性,一是兩性的,能夠在分離柱中達到一個平衡位置,二是可以作為“載體”,能夠“運載”電流和pH能力.Biolyte是在丙烯乙胺與乙烯亞胺縮合并蒸餾得到的多胺混合物中再引入磺酸基團或磷酸基團后合成的.其他特性是分子量小,可溶性好,緩沖能力強,導電性均勻,紫外吸收低,不發熒光,無毒、無生物學效應,具有螯合性質.所有載體兩性電解質分子都荷電,只是在溶液中荷正電和荷負電是相等的,所以總的凈電荷為零,當引入電場時,載體兩性電解質分子將向陰極和陽極移動,當它達到凈電荷是零的位置時才停止從而給出一個pH梯度.也必須選用合適的濃度,一般使用的濃度范圍是 0.2-2%.
3.6 蛋白酶抑制劑:蛋白酶抑制劑能夠暫時或者永久性的破壞蛋白酶的活性,減少蛋白質被降解和修飾的可能性.
3.7 DNase I 和RNase A.消化DNA和RNA,減少污染.
 
編輯:songjiajie2010

 
分享:
[ 網刊訂閱 ]  [ 檢驗技術搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗技術
點擊排行
檢驗技術
 
 
Processed in 0.163 second(s), 15 queries, Memory 0.9 M
主站蜘蛛池模板: 日韩欧美中文字幕在线观看| 欧美成人手机视频免费播放| 久久大香| 我想吃你的粉嫩 蜜汁| 国产精品久久久久激情影院| 九九成人免费视频| 亚洲天堂网视频| 成人欧美一区二区三区视频| 色偷偷7777www人| 成人国产在线不卡视频| 两个男生互摸j出精视频| 亚洲伊人久久大香线蕉影院| 国产成+人+综合+亚洲欧美丁香花| 日韩免费成人| 永久精品| 欧美在线看欧美高清视频免费| 亚洲精品高清在线| 欧美好看的免费电影在线观看| 亚洲精品视频在线观看视频| 免费观看欧美成人1314色| 中文字幕亚洲综合久久| 蝌蚪久久窝| 在线观看成人| 美女被免费网站在线视频软件 | 91亚洲国产成人久久精品网站| 看a网址| 亚洲一区二区三区在线网站| 久色亚洲| 国产精品高清m3u8在线播放| 日韩一区二区视频在线观看| 成人伊人亚洲人综合网站222| 污污在线观看视频| 国产免费一区二区在线看| 伊人久久综合网站| 欧美日韩国产在线人成dvd| 2020年国产精品午夜福利在线观看 | 精品成人在线| 亚洲精品成人中文网| 久久精品三级视频| 国产精品嫩草影视在线观看 | 成年人免费观看的视频|