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放射免疫測(cè)定胰島素

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28

材料及試劑

1.胰島素標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度的)

2125 I-胰島素

3.抗血清

4.第二抗體

5.分析試劑 0.05 Mol/L pH7.4 PBS液+1%正常兔血清。

6 -計(jì)數(shù)儀

7.試管、加樣器、離心機(jī)等

操作方法:

1.按表進(jìn)行。

胰島素RIA測(cè)定方法(單位:μu/ml)

標(biāo)準(zhǔn)管

待測(cè)管

0

10

20

40

80

160

1

2

試管號(hào)

12

34

56

78

910

1112

1314

1516

標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度)

100

100

100

100

100

100

待測(cè)血清

100

100

抗血清(二抗)

100

100

100

100

100

100

100

100

分析試劑

100

100

100

100

100

100

100

100

混勻,37溫育2h

125 I-胰島素

100

100

100

100

100

100

100

100

混勻,37溫育1h

第二抗體

100

100

100

100

100

100

100

100

混勻,37反應(yīng)30min

2.測(cè)定和計(jì)算 反應(yīng)完畢后,將各管于室溫3 000 r/ min離心30min,仔細(xì)吸取上清液,收集于放射性廢液貯存容器內(nèi)。用 -計(jì)數(shù)儀分別測(cè)量各管沉淀物(B)的放射性強(qiáng)度(cpm),以兩管的cpm均值表示。再以第12管的cpm值為Bo,分別計(jì)算結(jié)合率(B%,即B/Bo×100%),用B%為縱坐標(biāo),不同濃度胰島素標(biāo)準(zhǔn)品為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后根據(jù)待檢管的B%,從標(biāo)準(zhǔn)曲線中即可查得胰島素的相應(yīng)含量。

 

 
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